ESPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL

 
  SEP                       SNEST                    DGEST




                           

TRABAJO DE: el experimento de Meselson y Stahl

FRANCISCO GALINDEZ DE PAZ

NUM.CONTROL: 09930037

LIC. BIOLOGIA VI SEMESTRE

CIUDAD ALTAMIRANO, GRO. MÉXICO. A  06 de marzo del 2012

Experimento de Meselson y Stahl sobre la síntesis de DNA en procariotas

 

Meselson y Stahl (1958) demostraron que el DNA de E. coli se replica de forma semiconservativa, tal como habían propuesto Watson y Crick (1953) al elaborar el modelo molecular del DNA y tal como podía deducirse de los experimentos realizados previamente por Taylor (1957) sobre la síntesis de DNA en eucariotas. El experimento de Meselson y Stahl está basado en la variación de la densidad de flotación del DNA derivada de la utilización del isótopo pesado del nitrógeno (N15) y el análisis de dicha variación mediante la técnica de ultracentrifugación en gradiente de Cloruro de Cesio.

para ello llevaron acabo el siguiente experimento:



1) 
 Cultivaron bacterias E. Coli en un medio que contenía ^{15NH_{4Cl como única fuente de nitrógeno.}}

 El ^{15N se incorpora a las bases de pirimidina y purina; por lo tanto, el ADN pasa a ser más pesado de lo habitual.}

2)
 Tomaron las bacterias cultivadas en ^{15N y las transfirieron a un medio que contenía 14NH_{4Cl. El ADN fue aislado en varias ocasiones a partir de la nueva ubicación de la bacteria en el medio 14N. Cultivaron las bacterias durante dos generaciones más y aislaron el ADN.}}

3)

 Utilizaron la técnica denominada centrifugación por gradiente de densidad, que permite separar entre sí moléculas de ADN según su densidad.

El ADN está mezclado con una solución de cloruro de cesio (CsCl). La mezcla de CsCl y ADN se centrifuga a una fuerza G alta en un tubo de centrifugación. El ADN dejará banda en el gradiente de CsCl (formada por la centrifugación) a su densidad correspondiente.

Se centrifugó una pequeña cantidad del ^{15N / 15N ADN y las diferentes muestras de ADN tomadas de las generaciones 1 y 2, en el gradiente CsCl. Tras la centrifugación de las diferentes muestras:}

 

¿Por qué razón forma el ADN una "banda" en una posición determinada del gradiente CsCl?

El ADN se sedimenta formando una capa en la posición del tubo en la cual la densidad de la solución de CsCl es igual a la del ADN.

Los experimentos de Meselson y Stahl demostraron que el ADN se replica siguiendo un método semiconservativo. La ausencia de la banda en la posición pesada del gradiente tras 1 generación contradecía el método conservativo; por lo tanto, la replicación era semiconservativa. El modelo de Crick y Watson era correcto – la replicación del ADN mediante un método semiconservativo: 1 hebra de cada molécula de doble hebra de ADN se conserva en la nueva molécula hija de ADN.

 

BIBLIOGRAFIA

http://mit.ocw.universia.net/7.012/f01/pdf/molebio-1.pdf

http://www.ehu.es/biomoleculas/an/pdf_doc/meselson_stahl.pdf