4.4 Replicación in vitro del ADN (PCR)

  Reacción en Cadena de la Polimerasa.

• Es la amplificación de DNA in vitro por medio de la polimerización en cadena de DNA utilizando un termociclador.
• El propósito del PCR es hacer muchas copias de un fragmento de DNA.
• Se realiza la amplificación de un segmento específico de DNA, teniendo poco material disponible.

La Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) es una técnica de laboratorio que permite la copia in vitro de secuencias específicas de DNA y que ha revolucionado el campo de la Biología Molecular. Conceptualmente, la PCR es una técnica sencilla, consiste en la separación por calor de las dos cadenas del DNA que se quiere amplificar, y su copia simultánea a partir de un punto, determinado por un fragmento de DNA artificial llamado cebador, mediante la acción de una enzima denominada DNA polimerasa. El resultado es la duplicación del número de moléculas de una secuencia concreta de DNA. Este proceso se repite un número determinado de veces o ciclos, generalmente 30, y se consigue un aumento o amplificación exponencial del número de copias del fragmento de DNA molde. }

                                                     

Fue diseñada por el Dr. KaryMullis en 1987.

• Ganó el premio Nóbel de Química en 1993 por su invento.
• Utilizo el PCR para amplificación del gen de b-hemoglobina humana, y el diagnostico prenatal de anemia falciforme.

  La gran ventaja de la PCR es que amplifica únicamente el fragmento de DNA que queremos aunque esté en cantidades mínimas (alta sensibilidad) o en presencia de grandes cantidades de otros DNA semejantes (alta especificidad). La reacción es eficaz incluso si se parte de muestras de DNA muy poco purificadas, en presencia de otros componentes.