9.2 MECANISMOS DE TRANSFERENCIA ARTIFICIAL

9.2 MECANISMOS DE TRANSFERENCIA ARTIFICIAL

Muchas especies bacterianas carecen de sistemas naturales de transformación. En los últimos años se ha logrado desarrollar sistemas artificiales para producir “células competentes” en algunas de ellas (como Escherichia coli, Salmonella typhimurium y algunas especies de Pseudomonas), lo cual ha hecho avanzar los estudios genéticos, especialmente mediante manipulaciones in vitro: por ejemplo, la transformación artificial de E. coli con ADN plasmídico es una de los métodos básicos de la Ingeniería Genética.

            La obtención de células competentes en E. coli consiste en ir concentrando un cultivo recogido en fase logarítmica, mediante lavados sucesivos en una solución fría (4ºC) de Cl₂Ca, tras lo cual la mezcla de células y ADN se someten a unos 2 min. a 42ºC (choque por calor). Este tratamiento altera las envueltas (sobre todo la membrana externa) y aumenta su permeabilidad al ADN. Los plásmidos entran a la célula como moléculas de cadena doble intactas, mientras que los ADN lineales, que entran de la misma forma, son degradados por nucleasas citoplásmicas (RecBCD). Los transformantes se suelen seleccionar en base a la resistencia a algún o algunos antibióticos conferidos por los plásmidos artificiales usados en Ingeniería Genética.

            En otras bacterias (p. ej., en ciertas Gram-positivas) el método consiste en obtener protoplastos en medio hipertónico, y posterior tratamiento de éstos mezclados con el ADN con un agente como el polietilénglicol, que fomenta la fusión de protoplastos y el englobamiento de ADN exógeno.

BIBLIOGRAFIA

http://www.google.es/imgres?imgurl=http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/images/17tipos_transfer.jpg&imgrefurl=http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/17transforma.htm&usg=___DLDVFQlXUnJ056zdHoVHfGvoIY=&h=470&w=519&sz=35&hl=es&start=1&zoom=1&tbnid=V6cxHnUsfS5vuM:&tbnh=119&tbnw=131&ei=7LfPT-vIBarY2gXBzLimDA&prev=/images%3Fq%3Dmecanismos%2Bde%2Btransferencia%2Ben%2Bprocariotas%26hl%3Des%26lr%3D%26sa%3DG%26tbm%3Disch&itbs=1